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食品中腐霉利殘留量的檢測方法 —— 氣相色譜 - 質(zhì)譜法
腐霉利是常用果蔬、糧油類殺菌劑，廣泛用于農(nóng)作物病蟲害防治，易在農(nóng)產(chǎn)品及加工食品中形成農(nóng)藥殘留。該物質(zhì)過量攝入會損害人體肝腎機(jī)能，影響內(nèi)分泌系統(tǒng)，長期食用超標(biāo)食品存在健康隱患。
本方法參考 SN/T 2230-2008《進(jìn)出口食品中腐霉利殘留量的檢測方法 氣相色譜 - 質(zhì)譜法》，本方法適用于茶葉、臍橙、板栗、葡萄酒、洋蔥、小米、蜂蜜、魚肉、雞肝、豬肝中腐霉利殘留量的測定。
一、方法原理
試樣采用丙酮 - 正己烷振蕩提取，石墨化碳固相萃取柱或中性氧化鋁固相萃取柱凈化，氣相色譜 - 質(zhì)譜儀測定和確證，外標(biāo)法定量。
二、主要儀器和試劑
a. 氣相色譜 - 質(zhì)譜聯(lián)用儀：GC138N-MS8300N，上海儀電分析儀器有限公司；
b. 液體自動進(jìn)樣器：AS-9，上海儀電分析儀器有限公司；
c. 毛細(xì)管色譜柱：DB-5MS，30m × 0.25mm × 0.25 μm；
d. 標(biāo)準(zhǔn)儲備液：乙腈中腐霉利標(biāo)準(zhǔn)溶液，ρ=100 mg/L，有證標(biāo)準(zhǔn)溶液；
e. 正己烷，色譜純；
f. 丙酮，色譜純；
g. 氯化鈉；
h. 乙腈，色譜純；
i. 一般實(shí)驗(yàn)室常用儀器和設(shè)備。
三、實(shí)驗(yàn)方法
3.1 氣相色譜參考條件
進(jìn)樣口溫度：250℃；
柱流量：1.0mL/min，恒流模式；
進(jìn)樣模式：不分流進(jìn)樣；
不分流時間：0.75min；
不分流流量：60 mL/min；
柱箱升溫程序：初始溫度 100℃，保持 1min，以 10 ℃/min 升溫到 280 ℃，保持 11min；
載氣：高純氦氣。
3.2 質(zhì)譜參考條件
離子源：電子轟擊離子源 (EI)；電子能量：70eV；
離子源溫度：250℃；
傳輸線溫度：280℃；
掃描方式：全掃描模式（SCAN）定性，質(zhì)譜掃描范圍：35 amu 至 350 amu。選擇離子監(jiān)測（SIM）定量；
溶劑延遲：8min。
3.3 標(biāo)準(zhǔn)系列的制備
標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：取 7 個潔凈的 1 mL 容量瓶，預(yù)先加入適量的正己烷溶液，再分別加入 5 μL、10 μL、20 μL、50 μL、100 μL、200 μL 和 500 μL 的腐霉利標(biāo)準(zhǔn)使用液（ρ=10 μg/mL），再用正己烷定容至刻度線，配制成腐霉利濃度分別為 0.05 μg/mL、0.1 μg/mL、0.2 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL 和 5.0 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)系列。參照儀器參考條件，由低濃度到高濃度依次進(jìn)樣分析。以腐霉利的濃度為橫坐標(biāo)，響應(yīng)為縱坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3.4 樣品處理
3.4.1 提取
對于茶葉、板栗、蜂蜜、小米樣品，稱取 1g 試樣（精確至 0.001g）。對于臍橙、葡萄酒、洋蔥、魚肉、雞肝、豬肝樣品，稱取 2g 試樣（精確至 0.001g）。
將稱取的試樣置于 15mL 離心管中，加入 1g 氯化鈉，加入 2mL 水，于混勻器上混勻 30s，放置 15min。加入 3mL 丙酮 - 正己烷（1+2），在混勻器上混勻 2min。3000r/min 離心 1min，吸取上層萃取液于另一試管中。再分別加入 3mL 丙酮 - 正己烷（1+2）溶液重復(fù)提取兩次，合并萃取液。
3.4.2 凈化
3.4.2.1 茶葉、臍橙、板栗、葡萄酒
將石墨化碳黑固相萃取柱（柱內(nèi)填約 1cm 高的無水硫酸鈉層）安裝在固相萃取的真空抽濾裝置上，先用 4mL 丙酮 - 正己烷（1+1）預(yù)淋洗萃取柱，棄去全部預(yù)淋洗液。將提取液加入到石墨化碳黑固相萃取柱中，待提取液全部流出后，再用 3mL 丙酮 - 正己烷 (1+1) 洗脫萃取柱，保持流速 1.5mL/min，收集全部流出液，45℃下氮?dú)獯抵两?。用正己烷定容?0.5mL，供 GCMS 測定。
3.4.2.2 洋蔥、小米、蜂蜜、魚肉、雞肝、豬肝
將中性氧化鋁固相萃取柱（柱內(nèi)填約 1cm 高的無水硫酸鈉層）安裝在固相萃取的真空抽濾裝置上，先用 4mL 丙酮 - 正己烷（1+1）預(yù)淋洗萃取柱，棄去全部預(yù)淋洗液。將提取液加入到中性氧化鋁固相萃取柱中，待提取液全部流出后，再用 3mL 丙酮 - 正己烷 (1+1) 洗脫萃取柱，保持流速 1.5mL/min，收集全部流出液，45℃下氮?dú)獯抵两?。用正己烷定容?0.5mL，供 GCMS 測定。
3.5 測定
3.5.1 色譜測定與確證
根據(jù)樣液中腐霉利的含量情況，選定峰面積相近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，對標(biāo)準(zhǔn)工作液和樣液等體積穿插進(jìn)樣，測定標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液中腐霉利的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測的線性范圍內(nèi)。
在相同實(shí)驗(yàn)條件下，樣品中待測物質(zhì)的質(zhì)量色譜保留時間與標(biāo)準(zhǔn)工作液相同，并且在扣除背景后的樣品質(zhì)譜圖中，所選離子均出現(xiàn)，經(jīng)過對比所選擇離子的豐度比與標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)離子的豐度比，其值在允許范圍內(nèi)（允許范圍見表 1）則可判定樣品中存在對應(yīng)的待測物。
表 1 使用氣相色譜質(zhì)譜定性時相對離子豐度最大容許誤差
相對豐度（基峰）/% >50 >20~50 >10~20 ≤10
GCMS 的相對離子豐度最大容許誤差 /% ±10 ±15 ±20 ±50
3.5.2 空白實(shí)驗(yàn)
除不加試樣外，均按上述測定步驟進(jìn)行。
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
4.1 測試譜圖
圖 1 腐霉利標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的總離子流色譜圖
圖 2 腐霉利標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的質(zhì)譜圖
4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線
圖 3 腐霉利校正以及校正曲線
4.3 結(jié)果計(jì)算和表述
用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或按式（1）計(jì)算試樣中腐霉利的含量：
X=(A×Cs×V)/(As×m)
式中：
X—— 試樣中腐霉利的殘留含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；
A—— 試樣中腐霉利的峰面積；
Cs—— 標(biāo)準(zhǔn)工作液中腐霉利的濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；
As—— 標(biāo)準(zhǔn)工作液中腐霉利的峰面積；
V—— 樣液最終定容體積，單位為毫升（mL）；
m—— 最終樣液所代表的試樣量，單位為克（g）。
注：計(jì)算結(jié)果須扣除空白值。
4.4 檢出限計(jì)算
以正己烷為空白，取 7 個潔凈的 1mL 容量瓶，分別加入適量的腐霉利標(biāo)準(zhǔn)使用液 (10 μg/mL)，配成腐霉利濃度為 0.025mg/kg 的空白加標(biāo)溶液，按儀器條件平行測定 7 次，計(jì)算 7 次測定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差，再使用標(biāo)準(zhǔn)偏差乘以 3.143，得到腐霉利的方法檢出限。結(jié)果見表 2。
表 2 腐霉利的方法檢出限測試結(jié)果
化合物名稱 空白加標(biāo)濃度 0.025mg/kg 平均值 (mg/kg) SD (mg/kg) MDL (mg/kg)
腐霉利 0.0293、0.0298、0.0293、0.0299、0.0304、0.0302、0.0296 0.0298 0.000436 0.00137
4.5 精密度測試
以正己烷為空白，取 6 個潔凈的 1mL 容量瓶，分別加入適量的腐霉利標(biāo)準(zhǔn)使用液 (10 μg/mL)，配成腐霉利濃度為 0.05mg/kg 的空白加標(biāo)溶液，按儀器條件平行測定 6 次，計(jì)算 6 次測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見表 3。按上述相同步驟測定空白加標(biāo)濃度為 0.75 mg/kg 的精密度數(shù)據(jù)，結(jié)果見表 4。
表 3 空白加標(biāo)濃度 0.05 mg/kg 精密度測試結(jié)果
化合物名稱 空白加標(biāo)濃度 0.05mg/kg 測試結(jié)果 (mg/kg) 平均值 (mg/kg) SD (mg/kg) RSD (%)
腐霉利 0.0463、0.0487、0.0484、0.0476、0.0483、0.0473 0.0476 0.001002 2.11
表 4 空白加標(biāo)濃度 0.75 mg/kg 精密度測試結(jié)果
化合物名稱 空白加標(biāo)濃度 0.75mg/kg 測試結(jié)果 (mg/kg) 平均值 (mg/kg) SD (mg/kg) RSD (%)
腐霉利 0.70、0.68、0.67、0.70、0.70、0.67 0.6858 0.01429 2.08
4.6 正確度測試
以正己烷為空白，取 6 個潔凈的 1mL 容量瓶，分別加入適量的腐霉利標(biāo)準(zhǔn)使用液 (10 μg/mL)，配成腐霉利濃度為 0.05mg/kg 的空白加標(biāo)溶液，按儀器條件平行測定 6 次，計(jì)算 6 次測定結(jié)果的回收率，結(jié)果見表 5。按上述相同步驟測定空白加標(biāo)濃度為 0.75 mg/kg 的回收率數(shù)據(jù)，結(jié)果見表 6。
表 5 空白加標(biāo)濃度 0.05 mg/kg 回收率測試結(jié)果
化合物名稱 空白加標(biāo)濃度 0.05mg/kg 含量 (mg/kg) 回收率 (%) 回收率范圍 (%)
腐霉利 0.0463、0.0487、0.0484、0.0466、0.0483、0.0473 92.5、97.3、96.7、93.2、96.5、94.5 92.5~97.3
表 6 空白加標(biāo)濃度 0.75 mg/kg 回收率測試結(jié)果
化合物名稱 空白加標(biāo)濃度 0.75mg/kg 含量 (mg/kg) 回收率 (%) 回收率范圍 (%)
腐霉利 0.70、0.68、0.67、0.70、0.70、0.67 92.7、90.7、89.3、93.3、93.3、89.3 89.3~93.3
4.7 樣品測試結(jié)果
對花生樣品按照儀器條件進(jìn)行測定，結(jié)果如表 7 所示。
表 7 花生樣品測定結(jié)果
化合物名稱 測試結(jié)果 (mg/kg) 測試結(jié)果 (mg/kg) 平均值 (mg/kg) 兩次平行測定結(jié)果的絕對差值 (mg/kg)
腐霉利 ND ND ND 0.00
注：ND = 未檢出

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